高效液相色譜柱用于快速分離混合極性樣品，與C8或C18柱相比，疏水性較小，通常可使用水相成分高的洗脫液。對非極性化合物表現了更短的保留時間，對極性化合物幾乎沒有明顯影響。高效液相色譜柱是以液體作為流動相的一種色譜分析法，它亦是根據不同組分在流動相和固定相之間的分配系數的差異來對混合物進行分離的。氣相色譜中評價色譜柱柱效的方法及計算理論塔板數的公式同樣適合于高效液相色譜。

　　性能優點：

　　1、分離生物分子的理想選擇*封端；

　　2、高覆蓋率，*鍵合，球型硅膠載體，*封端中等的疏水性；

　　3、固定相的疏水性較小；分離特性不同于ODS。

 

　　實驗條件：

　　1、色譜柱1長15cm，內徑4.6mm，裝填10um的C-18烷基鍵合固定相；

　　2、色譜柱2長15cm，內徑4.6mm，裝填5um的C-18烷基鍵合固定相；

　　3、流動相甲醇：水(85:15)， 流量0.8ml/min；

　　4、紫外光度檢測器波長 254nm，靈敏度0.08；

　　5、進樣量5μ1。

 

　　高效液相色譜柱的實驗步驟：

　　1、根據實驗條件和實驗錄像指導，按KLC321儀器操作步驟將儀器調節至進樣狀態，待儀器流路及電路系統達到平衡，色譜工作站之“采樣系統”基線平直時，即可進樣；

　　2、吸取5μ1苯、萘、聯苯的甲醇溶液進樣，并用色譜工作站記錄色譜數據，同時記錄色譜數據文件名；

　　3、用色譜工作站之“數據處理”系統處理數據文件并記錄所需數據；

　　4、在儀器上測定色譜柱2的塔板數，打印色譜圖并比較色譜柱柱效差異。

 

　　數據記錄及處理：

　　1、記錄實驗條件。

　　a、色譜柱與固定相；

　　b、流動相及其流量、柱前壓；

　　c、檢測器及其靈敏度；

　　d、進樣量；

　　2、記錄色譜峰的保留時間tR和相應色譜峰的半峰寬Y12。

　　3、分別計算苯、萘、聯苯在該色譜柱上的理論塔板數n和理論塔板高度。